Saturday, 25 October 2014

CARA MEMBUAT MEDIA KULTUR JARINGAN

Bagi anda yang suka dengan bunga-bunga cantik atau hal-hal yang berhubungan dengan pertanian tanaman, tentu tidak kaget dengan istilah kultur jaringan. Sebenarnya kultur jaringan adalah hal yang susah tapi mudah. Saya dulu pernah melakukan kultur jaringan jagung, berhasil. Kemudian mencoba mengkultur jati, gagal. Hahahaha... Namanya belajar. 


Menurut saya, keberhasilan kultur jaringan sangat bergantung pada kebiasaan kita sendiri. Semakin sering melakukan kultur, maka akan semakin besar tingkat keberhasilannya. Kali ini saya akan mencoba menjelaskan langkah-langkah membuat media untuk kultur jaringan. Media ini bisa di pakai untuk tebu, bunga dan lain-lain. Berikut metodenya :


  1. Timbang sukrosa sebanyak 4 x 30 gr = 120 gr
  2. Timbang agar agar untuk MSI 2 x 8 gr = 16 gr
  3. Timbang agar agar untuk MS II 2 x 8 gr = 16 gr
  4. Pipet larutan stok sebagai berikut :
    • Stok A (20 cc/l) =  4 x 20cc    = 80 cc
    • Stok B (20 cc/l) = 4 x 20 cc    = 80 cc
    • Stok C (5 cc/l) = 4 x 5 cc        = 20 cc
    • Stok D (5 cc/l) = 4 x 5 cc        = 20 cc
    • Stok E (5 cc/l) = 4 x 5 cc        = 20 cc
    • Stok F (5 cc/l) = 4 x 5 cc         = 20 cc
    • Stok G (5 cc/l) = 4 x 5 cc        = 20 cc
5. Masukkan stok A sampai G kedalam sukrosa dan tambahkan air kelapa sebanyak 4 x
    100 cc = 400cc.
6. Aduk campuran tersebut dengan stirer hot plate dan tambahkan aquades sampai 800  
           cc. Setelah larut bagi 2 larutan tersebut 400 cc untuk MS I dan 400 ccuntuk MST.


  1. Media MS I
    • 400 cc larutan + hormon 2.4D 6 mgr (3 mgr/l) yang dilarutkan dengan NaOH
    • Tambahkan aguades sampai 2 liter lalu kocok dengan stirer
    • Ukut pH larutan sampai 5.8, kalau basa +Hcl 0.1N kalau asam NaOH 0.1N.
    • Panaskan larutan tersebut diatas kompor, masukan agar agar.
    • Jika sudah larut dan rata masukan media tersebut kedalam tabung kultur masing masing 10 cc.
    • Sterilisasi media tersebut didalam autoclove dengan tekanan atmosfir selama 20 menit, inkubasi media tersebut selama 3 hari.



  1. Media MST.
    • 400 cc larutan + hormon IAA 4 mg (2mgr / lt)yang dilarutkan kedalam NaOH dan hormone dalapon 118 mgr (59 mgr/ltr) yang dilarutkan kedalam aquades.
    • Tambahkan Aquades sampai 2 liter lalu di stirer.
    • Ukur pH Larutan sampai 5.8
    • Panaskan larutan diatas kompor, masukkan agar agar.
    • Jika sudah larut masukan kedalam tabung kultur sebanyak 25 cc/tabung.
    • Sterilisasi media tersebut dalam autoclove dengan tekanan 1 atmosfir selama 20 menit, inkubasi media tersebut selama 3 hari.

  1. Media MSR.
    • Prosedur pembuatan media MSR sama dengan MS I dan MST hanya sucrosa yang ditimbang 45 gr / ltr media dan tanpa menggunakan agar agar. Sedangkan hormon yang digunakan kinetin 0.1 ppm dan NAA 2 ppm.



Larutan Induk Untuk 50 liter 
Kode
Senyawa
Gram
Dilarutkan
dalam
Pemakaian
per liter
A
B
C
D




E



F
NH4NO3
KNo3
CaCl2 2H2O
H3BO3
KH2PO4
CoCl2
Na2MoO4 2H2O
KI
MgSO4 7H2O
Zn SO4 7H2O
Cu SO4 5H2O
MnSO4 7H2O
Na2 EDTA
FeSO4 7H2O
82.50
95.00
22.00
0.31
8.50
0.0013
0.0125
0.0415
18.50
0.43
0.0013
0.7525
1.86
1.39
1000 ml
1000 ml
250 ml
250 ml




250 ml



250 ml
20 ml
20ml
5 ml
5 ml




5 ml



5 ml




Ditimbang langsung :
G
1 liter
6 liter
12 liter
18 liter
24 liter
Inositol
Thiamine
Pyridoxine
Biotine
1.0  Mgr
0.4 mgr
4.0 mgr
0.2 mgr
0.006 gr
0.0024 gr
0.024 gr
0.0012 gr
0.012 gr
0.0048 gr
0.048 gr
0.0024 gr
0.018 gr
0.0072 gr
0.072 gr
0.0036 gr
0.024 gr
0.0096 gr
0.096 gr
0.0048 gr

Hormon
1 liter
3 liter
6 liter
12 liter
Keterangan
2.4 D
IAA
Dalapon
3 mgr
2 mgr
59 mgr
0.009 gr
0.006 gr
0.177 gr
0.018 gr
0.012 gr
0.354 gr
0.036 gr
0.024 gr
0.708 gr
MS I
MS II
MS II


Catatan :
            Untuk perliter media ditambah :
·         Sucrosa 30 gr
·         Agar agar 8 gr
·         Air Kelapa 100 ml
·         pH 5.8
Untuk media MSR ditambah :
·         Kinetin 0.1 ppm

·         NAA 2.0 ppm.



Post a Comment