Bagi anda yang suka dengan bunga-bunga cantik atau hal-hal yang berhubungan dengan pertanian tanaman, tentu tidak kaget dengan istilah kultur jaringan. Sebenarnya kultur jaringan adalah hal yang susah tapi mudah. Saya dulu pernah melakukan kultur jaringan jagung, berhasil. Kemudian mencoba mengkultur jati, gagal. Hahahaha... Namanya belajar.
Menurut saya, keberhasilan kultur jaringan sangat bergantung pada kebiasaan kita sendiri. Semakin sering melakukan kultur, maka akan semakin besar tingkat keberhasilannya. Kali ini saya akan mencoba menjelaskan langkah-langkah membuat media untuk kultur jaringan. Media ini bisa di pakai untuk tebu, bunga dan lain-lain. Berikut metodenya :
- Timbang sukrosa sebanyak 4 x 30 gr = 120 gr
- Timbang agar agar untuk MSI 2 x 8 gr = 16 gr
- Timbang agar agar untuk MS II 2 x 8 gr = 16 gr
- Pipet larutan stok sebagai berikut :
- Stok A (20 cc/l) = 4 x 20cc = 80 cc
- Stok B (20 cc/l) = 4 x 20 cc = 80 cc
- Stok C (5 cc/l) = 4 x 5 cc = 20 cc
- Stok D (5 cc/l) = 4 x 5 cc = 20 cc
- Stok E (5 cc/l) = 4 x 5 cc = 20 cc
- Stok F (5 cc/l) = 4 x 5 cc = 20 cc
- Stok G (5 cc/l) = 4 x 5 cc = 20 cc
5. Masukkan stok A sampai G kedalam sukrosa dan
tambahkan air kelapa sebanyak 4 x
100 cc =
400cc.
6. Aduk campuran tersebut dengan stirer hot plate dan
tambahkan aquades sampai 800
cc. Setelah larut
bagi 2 larutan tersebut 400 cc untuk MS I dan 400 ccuntuk MST.
- Media MS I
- 400 cc larutan + hormon 2.4D 6 mgr (3 mgr/l) yang dilarutkan dengan NaOH
- Tambahkan aguades sampai 2 liter lalu kocok dengan stirer
- Ukut pH larutan sampai 5.8, kalau basa +Hcl 0.1N kalau asam NaOH 0.1N.
- Panaskan larutan tersebut diatas kompor, masukan agar agar.
- Jika sudah larut dan rata masukan media tersebut kedalam tabung kultur masing masing 10 cc.
- Sterilisasi media tersebut didalam autoclove dengan tekanan atmosfir selama 20 menit, inkubasi media tersebut selama 3 hari.
- Media MST.
- 400 cc larutan + hormon IAA 4 mg (2mgr / lt)yang dilarutkan kedalam NaOH dan hormone dalapon 118 mgr (59 mgr/ltr) yang dilarutkan kedalam aquades.
- Tambahkan Aquades sampai 2 liter lalu di stirer.
- Ukur pH Larutan sampai 5.8
- Panaskan larutan diatas kompor, masukkan agar agar.
- Jika sudah larut masukan kedalam tabung kultur sebanyak 25 cc/tabung.
- Sterilisasi media tersebut dalam autoclove dengan tekanan 1 atmosfir selama 20 menit, inkubasi media tersebut selama 3 hari.
- Media MSR.
- Prosedur pembuatan media MSR sama dengan MS I dan MST hanya sucrosa yang ditimbang 45 gr / ltr media dan tanpa menggunakan agar agar. Sedangkan hormon yang digunakan kinetin 0.1 ppm dan NAA 2 ppm.
Larutan Induk
Untuk 50 liter
Kode
|
Senyawa
|
Gram
|
Dilarutkan
dalam
|
Pemakaian
per
liter
|
A
B
C
D
E
F
|
NH4NO3
KNo3
CaCl2
2H2O
H3BO3
KH2PO4
CoCl2
Na2MoO4
2H2O
KI
MgSO4
7H2O
Zn SO4
7H2O
Cu SO4
5H2O
MnSO4
7H2O
Na2 EDTA
FeSO4
7H2O
|
82.50
95.00
22.00
0.31
8.50
0.0013
0.0125
0.0415
18.50
0.43
0.0013
0.7525
1.86
1.39
|
1000
ml
1000
ml
250
ml
250
ml
250
ml
250
ml
|
20
ml
20ml
5
ml
5
ml
5
ml
5
ml
|
Ditimbang langsung :
G
|
1
liter
|
6
liter
|
12
liter
|
18
liter
|
24
liter
|
Inositol
Thiamine
Pyridoxine
Biotine
|
1.0
Mgr
0.4
mgr
4.0
mgr
0.2
mgr
|
0.006
gr
0.0024
gr
0.024
gr
0.0012
gr
|
0.012
gr
0.0048
gr
0.048
gr
0.0024
gr
|
0.018
gr
0.0072
gr
0.072
gr
0.0036
gr
|
0.024
gr
0.0096
gr
0.096
gr
0.0048
gr
|
Hormon
|
1
liter
|
3
liter
|
6
liter
|
12
liter
|
Keterangan
|
2.4 D
IAA
Dalapon
|
3 mgr
2 mgr
59 mgr
|
0.009
gr
0.006
gr
0.177
gr
|
0.018
gr
0.012
gr
0.354
gr
|
0.036
gr
0.024
gr
0.708
gr
|
MS
I
MS
II
MS
II
|
Catatan :
Untuk perliter
media ditambah :
·
Sucrosa 30 gr
·
Agar agar 8 gr
·
Air Kelapa 100 ml
·
pH 5.8
Untuk media MSR ditambah :
·
Kinetin 0.1 ppm
·
NAA 2.0 ppm.
